雙分子的互補(bǔ)在蛋白質(zhì)中的作用
生物體是一個比較復(fù)雜的有機(jī)物體，物質(zhì)的運(yùn)動都是靠生物體內(nèi)的一些蛋白質(zhì)在進(jìn)行維持，因此蛋白質(zhì)的含量成為我們研究生物體的主要路徑。以前我們都是通過比較傳統(tǒng)的方法的，但是存在著很多的弊端，經(jīng)常會產(chǎn)生一些誤差，為了避免這些問題，我們已經(jīng)改用蛋白質(zhì)測定儀了，結(jié)構(gòu)原理都是比較簡單的，主要還是比較便宜，價(jià)格方面大家都是能夠接受的。基于生物化學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物物理學(xué)和生物信息學(xué)的知識和技術(shù)，已經(jīng)建立了多種研究蛋白質(zhì)相互作用的方法。
由于 GFP 結(jié)構(gòu)緊密，不易被蛋白酶水解，無毒，不需要借助其他輔酶，在厭氧細(xì)胞以外的任何細(xì)胞中都能自我催化發(fā)射熒光，所以在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域中常常作為活體報(bào)告基因與擬研究的蛋白質(zhì)基因相融合，從而可以觀察所研究蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的定位、運(yùn)動等。最初 GFP 融合到目標(biāo)蛋白的方式主要有: N-端融合、C - 端融合或?qū)⒄麄�熒光蛋白融合到目標(biāo)蛋白中。在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)利用雙分子熒光互補(bǔ)研究蛋白質(zhì)間的相互作用是應(yīng)用最廣的。成熟的蛋白質(zhì)必須在細(xì)胞特定的部位才能發(fā)揮其生物學(xué)功能。利用 BiFC 能夠獲取蛋白質(zhì)相互作用復(fù)合物在細(xì)胞中的定位信息，為推斷蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能提供必要的基礎(chǔ)。
現(xiàn)行的 BiFC 是一種有力的實(shí)驗(yàn)工具，該技術(shù)可以用于轉(zhuǎn)錄因子間的互作、酶-底復(fù)合物的確定、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)、蛋白轉(zhuǎn)錄后修飾互作等方面的研究，還可以利用多彩的BiFC系統(tǒng)在1個細(xì)胞內(nèi)研究多種蛋白質(zhì)間的相互作用。該技術(shù)耗時比較短，可以在多種細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，所研究的蛋白質(zhì)處于天然的環(huán)境并且能夠直接報(bào)道蛋白質(zhì)相互作用在細(xì)胞中發(fā)生的位置。但是該系統(tǒng)也存在缺陷: 多個 BiFC 系統(tǒng)對溫度敏感，目前只有基于 Venus 和 Critrine 的兩個黃色 BiFC 系統(tǒng)可以在生理溫度條件下試驗(yàn)片段互補(bǔ)。另外，融合蛋白必須為可溶性表達(dá)，表達(dá)量過高會引起非特異性。中國糧油儀器網(wǎng) http://www.51wenwangwen.com/
